19 Июн Качественный анализ ПЦР на гепатит С
Причиной болезни является вирусный агент, который относится к РНК-содержащим возбудителям. Он имеет отличительную черту – способность мутировать, то есть изменять свою структуру. Благодаря этому инфекция ускользает от атаки иммунной системы и в большинстве случаев приводит к хронизации воспалительного процесса в печени.
Учитывая существование различных подтипов вируса, подбор лекарственных средств должен проводиться с учетом результатов генотипирования. Несмотря на длительное изучение болезни и особенностей строения HCV, до сих пор не удалось разработать специфическую прививку от заболевания.
Трудности ранней диагностики заключаются в бессимптомном течении гепатита, вследствие чего человек обращается к врачу на стадии цирроза. Чтобы вовремя обнаружить заболевание, требуется регулярное проведение медосмотров. Только путем лабораторного исследования крови удается выявить HCV и предупредить заражение окружающих. Дело в том, что носитель инфекции может длительное время не догадываться о патологии и продолжать передавать вирус здоровым людям.
Пути передачи
Вирус в большинстве случаев распространяется через кровь, так как в ней содержится наибольшая концентрация патогенных агентов. Таким образом, инфекция передается:
- при гемодиализе;
- при уколе зараженной иглой;
- в процессе драки, когда травмируются кожные покровы, и происходит гемоконтакт;
- при гемотрансфузии (переливании крови).
Вероятность заражения при интимной близости незначительная, так как в сперме и выделениях из влагалища содержится небольшое количество возбудителей. Риск инфицирования существенно увеличивается при нарушении целостности слизистой гениталий. Такое наблюдается при агрессивном и анальном сексе.
Что касается вертикального способа передачи инфекции, то он осуществляется в процессе родовой деятельности. В периоде вынашивания плода возбудитель не может проникнуть через плаценту к эмбриону. При естественных родах патогенный агент передается ребенку при травмировании его кожи, когда наблюдается контакт с кровью матери.
После проникновения возбудителя в здоровый организм начинается синтез антител, которые являются защитой от инфекции и относятся к иммунным структурам. Именно они обнаруживаются при первичном исследовании человека с помощью ИФА.
Для подтверждения диагноза пациенту проводится полимеразная цепная реакция. Она представляет собой анализ на выявление генетического материала патогенного агента и определение вирусной нагрузки.
Лабораторная диагностика гепатита С
Лабораторная диагностика начинается с проведения иммуноферментного анализа. Основная его задача заключается в обнаружении антител, вырабатывающихся против возбудителя. Его эффективность – почти 95%. Благодаря этому исследованию на доклинической стадии удается выявить вирусоносителя и направить его на дальнейшее обследование.
Качественный анализ ИФА указывает на наличие или отсутствие иммуноглобулинов в крови пациента. Его результат может быть «положительный» или «отрицательный». Получив первый вариант ответа, человек направляется на следующее обследование – ПЦР. Его цена зависит от качества реактивов и лаборатории. Стоимость полимеразной цепной реакции может достигать 4 тысяч рублей.
Особенности ПЦР
С помощью полимеразной цепной реакции даже небольшой объем биологического материала позволяет оценить вирусную нагрузку в крови, то есть подсчитать концентрацию возбудителей в одном миллилитре жидкости.
С появлением ПЦР диагностика гепатита значительно упростилась. Анализ дает возможность выявить РНК HCV, установить стадию инфекционного процесса и заразность вирусоносителя.
Существует несколько разновидностей генетической диагностики:
- качественный анализ ПЦР на гепатит С – подтверждает факт наличия или отсутствия HCV в крови обследуемого:
- количественный, благодаря которому можно подсчитать концентрацию вирусов и установить стадию болезни. Результат выдается в МЕ/мл или копии/мл (в зависимости от лаборатории);
- генотипирование – необходимо для определения генотипа HCV. Это требуется для точного подбора лекарственных средств, которые будут максимально эффективны в данном случае. Анализ косвенно указывает на тяжесть патологического процесса в печени. Так, при третьем генотипе возбудителя чаще всего наблюдается стеатоз, в основе развития которого лежит накопление жира в гепатоцитах (ее клетках). Помимо этого, тип вируса влияет на результат и продолжительность терапевтического курса.
Качественный анализ ПЦР на гепатит С
Первым делом в лаборатории биологический материал исследуется на наличие РНК HCV. Важно помнить, что качественный анализ на гепатит С имеет определенный уровень чувствительности, в связи с чем не всегда может давать верный ответ. В таком случае рекомендуется повторное проведение лабораторной диагностики с применением других реактивов.
Для получения достоверных результатов следует использовать тест-системы с чувствительностью – не ниже 50 МЕ/мл.
Результат диагностики может быть как «положительный», так и «отрицательный». Если возбудитель не найден в крови, исследование завершается. При выявлении патогенного агента в образце далее проводится количественный подсчет вирусной нагрузки.
Ложноотрицательный ответ получается, когда нарушается технологический процесс, например, в среду попадают активные компоненты, угнетающие построение копий возбудителя. Таким образом не удается отобразить истинную картину крови, из-за чего инфицирование человека не диагностируется.
Ложноположительный результат можно получить, если пробирка для забора биологического материала, а также среда для проведения исследования были загрязнены. Помимо этого, такой ответ анализа возможен при микст-инфекции, когда печень поражается несколькими вирусами, например, гепатитом С и D.
Показания для качественного исследования
Врач может назначать пациенту качественное исследование на выявление РНК вируса гепатита С:
- при получении положительного или сомнительного ответа иммуноферментной диагностики;
- для верификации диагноза;
- определения вирусной нагрузки;
- постановки стадии заболевания;
- диагностики микст-инфекции. Зачастую гепатит С поражает печень одновременно с вирусом «D»;
- определения терапевтической тактики с учетом генотипа возбудителя;
- оценки динамики изменений на фоне лечения противовирусными медикаментами.
К преимуществам полимеразной цепной реакции относится:
- высокая чувствительность методики, что позволяет установить факт инфицирования на доклинической стадии;
- выявление генетического материала возбудителя, а не антител к нему;
- возможность установления субтипа патогенного агента;
- высокая скорость диагностики, так как не требуется посев материала на питательную среду, а достаточно использовать специфические тест-системы. Человек получает результат спустя 5 часов;
- универсальность. Анализ позволяет выявить любой генетический материал (РНК, ДНК). Благодаря этому врач может подтвердить гепатит С и другие виды болезни (В);
- возможность выявления скрытой инфекции.
Количественное исследование
При исследовании крови с помощью полимеразной цепной реакции удается подсчитать количество возбудителей в фиксированном объеме биологического материала. Показатель представлен в МЕ/мл. Благодаря анализу можно установить степень заразности пациента, определить стадию инфекционного процесса, а также оценить эффективность лекарственной терапии.
На основании ПЦР специалист решает, какие дозы медикаментов позволяют блокировать размножение возбудителей. Кроме того, определяется длительность противовирусного лечения и прогноз для жизни. Важно помнить, что тест-системы имеют высокую чувствительность, поэтому метод дает возможность подтвердить инфицирование человека еще на доклинической стадии.
Генотипирование
Учитывая способность возбудителя мутировать, для определения тактики лечения и выбора противовирусных лекарств необходим его генотип. Например, лечение гепатита HCV 1 длится 48 недель, при этом положительная динамика отмечается лишь в 60% случаев. Генотипы 2 и 3 имеют более благоприятный прогноз. Противовирусные лекарства назначаются на 8 месяцев, а их эффективность достигает 85%.
Согласно статистическим данным, в большинстве случаев на территории Российской Федерации регистрируется HCV 1, 2 и 3.
При расшифровке лабораторного исследования может быть указан такой ответ – «не типируется». Это значит, что в кровеносной системе больного циркулирует вирус, которого не удается распознать тест-системой. Результат анализа в данном случае свидетельствует о заражении человека нетипичным для данной географической зоны возбудителем.
Как получить достоверные результаты?
Чтобы качественное исследование ПЦР по выявлению РНК возбудителя гепатита С показало правильные результаты, необходимо соблюдать требования по подготовке к лабораторной диагностике:
- забор крови осуществляется натощак, причем «голодный» промежуток не должен быть короче 8-ми часов;
- за два дня до исследования рекомендуется прекратить распитие спиртных напитков и отказаться от острых, жирных и копченых блюд;
- отменить введение лекарственных средств, снижающих свертываемость крови, например, гепарина. Если данные медикаменты назначены по жизненным показаниям, необходимо предупредить об этом врача. Кроме того, специалист должен знать о приеме других препаратов, которые могут повлиять на результат лабораторного исследования;
- накануне забора биологического материала не следует проводить физиотерапевтические процедуры и подвергать себя тяжелой физической нагрузке.
На результаты анализа может влиять не только человек, сдающий кровь, но и другие факторы, а именно:
- некачественный забор крови;
- несоблюдение рекомендаций по транспортировке биологического материала;
- недостаточная профессиональная подготовка работников лаборатории;
- несоблюдение техники проведения исследования;
- введение антикоагулянтов (гепарина) накануне забора крови. Данная группа лекарств снижает свертываемость, тем самым замедляя работу реактивов.
В разных лабораториях ответ диагностики может несколько отличаться, однако эти погрешности не влияют на конечный результат исследования.
Особое внимание уделяется видам тест-систем, которые используются в лаборатории. Зачастую предпочтение отдается реактивам с высокой чувствительностью. Это важно для пациентов с низкой вирусной нагрузкой, поскольку ее сложно обнаружить.
Как часто проводится лабораторное исследование?
Первично полимеразная цепная реакция проводится людям, у которых при иммуноферментном анализе были выявлены антитела к возбудителю гепатита. В данном случае она назначается для подтверждения факта заражения человека и установления стадии болезни. Кроме того, анализ позволяет определить субтип вируса, что особенно важно для выбора лекарственных средств.
Следующим периодом для обязательного лабораторного исследования является 3 месяца от начала противовирусной терапии. Диагностика дает возможность оценить эффективность медикаментов, откорректировать дозу или заменить их.
Помимо основных анализов, ПЦР может дополнительно проводиться на 4 и 24 неделях от начала лечения. Положительный прогноз болезни подтверждается уменьшением вирусной нагрузки по истечении трех месяцев терапии. Так, например, она должна снизиться с 1 миллиона МЕ/мл до нескольких сотен тысяч.
Если концентрация патогенных агентов в крови остается на прежнем уровне или несколько нарастает, это указывает на неэффективность противовирусных средств и требует их замены. С помощью ПЦР в конце лечения удается подтвердить выздоровление пациента.
Чтобы правильно трактовать результаты лабораторной диагностики, требуется консультация гепатолога или инфекциониста. Учитывая большую частоту ложных ответов при ИФА, анализ используют исключительно для первичного скрининга. Для более тщательного обследования пациента применяется полимеразная цепная реакция.